Сафиуллов Зуфар Зуфарович, канд. мед. наук, доцент кафедры нормальной анатомии
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Zufar Z. Safiullov, Cand. of Sci. (Medicine), Associate Professor, Department of Normal Anatomy
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Измайлов Андрей Александрович, канд. мед. наук, ассистент кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Andrey A. Izmailov, Cand. of Sci. (Medicine), Assistant Professor, Department of Histology, Cytology and Embryology
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Маркосян Ваге Аршалуйсович, канд. мед. наук, старший преподаватель кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Vage A. Markosyan, Cand. of Sci. (Medicine), Senior Lecturer, Department of Operative Surgery and Topographic Anatomy
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Хомяков Александр Евгеньевич, врач-патологоанатом, научный сотрудник лаборатории молекулярной и клеточной медицины
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Alexander E. Khomyakov, pathologist, Researcher, Laboratory of Molecular and Cellular Medicine
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Бойчук Наталья Валентиновна, канд. биол. наук, доцент кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Nataliya V. Boychuk, Cand. of Sci. (Biology), Associate Professor, Department of Histology, Cytology and Embryology
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Нигметзянова Мария Владимировна, канд. биол. наук, доцент кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Maria V. Nigmetzyanova, Cand. of Sci. (Biology), Associate Professor, Department of Histology, Cytology and Embryology
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Сираева Алина Рафаиловна, студентка
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Alina R. Siraeva, student
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Таргачев Султан Субханвердиевич, ассистент кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Sultan S. Targachev, Assistant Professor, Department of Operative Surgery and Topographic Anatomy
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Валиуллин Виктор Владимирович, д-р биол. наук, профессор кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Victor V. Valiullin, Dr. of Sci. (Biology), Professor, Department of Histology, Cytology and Embryology
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Исламов Рустем Робертович, д-р мед. наук, профессор, заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии
ул. Бутлерова, д. 49, г. Казань, 420012
Rustem R. Islamov, Dr. of Sci. (Medicine), Professor, Head of the Department of Histology, Cytology and Embryology
49, Butlerova str., Kazan, 420012
Поспелов Вадим Игоревич, профессор, научный руководитель
ул. Маршала Бирюзова, д. 32, Москва, 123060
Vadim I. Pospelov, Professor, Scientific Director
32, Marshala Biryuzova str., Moscow, 123060
Aim. To study the effectiveness of preventive gene therapy (within 2 days) and gene therapy in the acute phase (after 4 hours) of ischemic stroke in mini-pigs using an autologous leucoconcentrate (AutoLeuc) enriched with recombinant genes of vascular endothelial growth factor (VEGF165), glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) and neural cell adhesion molecule 1 (NCAM1), as well as the migration of leukocytes transduced with a chimeric adenoviral vector serotype 5 with fiber 35 serotype (Ad5/F35) and the green fluorescent protein (GFP) genome into immune defense organs.
Materials and methods. The experiment was conducted on 8-month-old Vietnamese lop-bellied mini-pigs (n=16). An ischemic stroke was created by occlusion of the distal branches of the left middle cerebral artery and the right common carotid artery. Genetically modified AutoLeuc was administered preventively intravenously 2 days before or in the acute phase 4 hours after stroke modelling; the control group was injected with 30 ml of saline solution. The morphology of the cerebral cortex was assessed using histological methods in the areas bordering the infarction and peri-infarction after 21 days. The migration of genetically modified Ad5/F35-GFP leukocytes into the brain, spleen, and submandibular lymph nodes was studied a week after stroke modelling.
Results. In the peri-infarction zone, the content of pyknotic neurons in control animals was higher, while the number of capillaries was lower than in the gene therapy groups. In the latter, neurons had a typical morphology with preserved outgrowths; in the control group, the outgrowths were tortuous and fragmented. Fluorescence microscopy after injection of AutoLeuc with Ad5/F35-GFP revealed GFP-positive cells in the spleen and submandibular lymph nodes.
Conclusion. 21 days after modeling a stroke in mini-pigs against the background of preventive gene therapy or gene therapy in the acute phase using VEGF165/GDNF/NCAM1 AutoLeuc, greater preservation of neurons and a higher density of capillaries in the peri-infarction zone of ischemic brain damage were established. Leukocytes with Ad5/ F35-GFP were found in the spleen and submandibular lymph nodes.
Цель. Изучить эффективность превентивной генной терапии (за 2 суток) и генной терапии в острую фазу (через 4 часа) ишемического инсульта у мини-свиньи с помощью аутологичного лейкоконцентрата (АутоЛК), обогащенного рекомбинантными генами сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF165), глиального нейротрофического фактора (GDNF) и нейрональной молекулы клеточной адгезии 1 (NCAM1), а также миграцию лейкоцитов, трансдуцированных химерным аденовирусным вектором 5 серотипа с фибером 35 серотипа (Ad5/F35) и геном зеленого флуоресцентного белка (GFP) в органы иммунной защиты.
Материалы и методы. Эксперимент проведен на 8-месячных вьетнамских вислобрюхих мини-свиньях (n = 16). Ишемический инсульт создавали путем окклюзии дистальных ветвей левой средней мозговой артерии и правой общей сонной артерии. Генетически модифицированный АутоЛК вводили превентивно внутривенно за 2 суток до или в острую фазу через 4 часа после моделирования инсульта, контрольной группе вводили 30 мл физиологического раствора. Морфологию коры мозга оценивали с помощью гистологических методов в пограничной с инфарктом и периинфарктной зонах через 21 сутки. Миграцию генетически модифицированных Ad5/F35-GFP лейкоцитов в головной мозг, селезенку, поднижнечелюстные лимфоузлы изучали через неделю после моделирования инсульта.
Результаты. В периинфарктной зоне содержание пикнотических нейронов у контрольных животных было выше, при этом количество капилляров было меньше, чем в группах генной терапии. У последних нейроны имели типичную морфологию с сохранными отростками, в контрольной группе отростки были извилисты и фрагментированы. Флуоресцентная микроскопия после введения АутоЛК с Ad5/F35-GFP выявила GFPпозитивные клетки в селезенке и поднижнечелюстных лимфатических узлах.
Заключение. Через 21 сутки после моделирования инсульта у мини-свиней на фоне превентивной генной терапии или генной терапии в острую фазу с помощью VEGF165/GDNF/NCAM1-АутоЛК установлена большая сохранность нейронов и выше плотность капилляров в периинфарктной зоне ишемического повреждения мозга. Лейкоциты с Ad5/F35-GFP обнаружены в селезенке и поднижнечелюстных лимфатических узлах.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.